FlowJo SweetSpot Web

Inputs

Population base es el gate padre en el export de FlowJo, por ejemplo CHO/Singlets.

Detector max es el límite superior del instrumento para estimar riesgo de saturación.

Minimum acceptable SI es el piso de separación mínima antes de evaluar invasión. Concentraciones con SI por debajo de este valor se descartan primero.

Dye configuration permite editar el canal detector y el color en los plots.

GFP está marcado como informational_only: contribuye a la invasión en otros canales y puede ser invadido, pero no se optimiza su concentración.

FlowJo file Population base Detector max Minimum acceptable SI

Dye configuration

Dye	Color	Target channel

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Results

No analysis yet.

Metric trends

Stain Index = (Mediana_teñido − Mediana_ST) / (2 × rSD_ST). Métrica de referencia para la calidad de la señal; se usa como factor corrector, no como criterio principal.

% positivas (Freq_Signal): fracción de células que cae en el gate positivo del canal propio. Más alto es mejor — refleja cuánta población está siendo detectada.

Invasión total: suma de fracciones de células que aparecen en los gates positivos de los canales vecinos. Más bajo es mejor.

Score = (% positivas / (1 + invasión total)) × SI_factor, donde SI_factor sube linealmente de 0 a 1 entre SI=0 y SI=mínimo aceptable, y se estabiliza en 1 a partir de ahí. El pico del Score es la concentración óptima.

Color por colorante, símbolo por clon. Se pueden editar los colores en la tabla de configuración.

Selection criteria

Cada colorante tiene su propio panel de Score.

Eje Y: Score = (% positivas / (1 + invasión)) × SI_factor. El pico de esta curva es la concentración óptima.

Eje X: concentración.

Punto con borde negro: concentración seleccionada.

Al aumentar la concentración, más células pueden ser positivas (sube Score), pero también pueden invadir otros canales (baja Score). El pico captura ese balance. El SI actúa como corrector: si la señal es muy débil, el Score se reduce proporcionalmente.